動物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留檢測的固相萃取方法
（PolyClean X-HLB）
一、實驗目的
本法為以 Polyclean X-HLB（60mg/3mL）柱開發(fā)的針對動物源食品（豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品）中硝基呋喃類代謝物殘留檢測的樣本前處理凈化方法，Polyclean X-HLB
（60mg/3mL）柱凈化效果良好，回收率滿足測試要求，重現(xiàn)性好，與知名廠商同型號柱性能相當。目標物采用反相高效液相色譜-紫外為檢測手段。
二、實驗目標物
四種硝基呋喃類代謝物：呋喃它酮代謝物 5-嗎啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ， CAS:43056-63-9）、呋喃西林代謝物氨基脲（縮寫 SEM，CAS:563-41-7）、呋喃妥因代謝物 1-氨基-2-內(nèi)酰脲（縮寫 AHD，2827-56-7）和呋喃唑酮代謝物 3-氨基-2-噁唑烷基酮（縮寫AOZ,80-65-9）。
三、應用范圍
本方法適用于動物源性食品包括豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品（魚類、蝦蟹類和貝類）中硝基呋喃類代謝物殘留檢測。
四、參考標準
參考國家標準《GB/T 20752-2006 豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》和農(nóng)業(yè)部公告《農(nóng)業(yè)部 1077 號公告-2-2008 水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物殘留量的測定》
五、實驗材料
NuAnalytical Polyclean X-HLB 固相萃取柱 60mg/3mL。六、實驗方法
1、 樣品待測溶液制備
（1）樣品稱取脫脂
稱取待測樣品 2g（精確到 0.01g），置于 50mL 離心管中加入 10mL 甲醇-水混合物（2+1），振蕩混勻 10min，4000r/min 離心 10min，吸取清液棄掉、離心管中試樣備用。
（2）水解衍生化
向上述離心管中加入 20mL0.2mol/L 鹽酸，振蕩混勻 10min，后加入 0.4mL 0.05mol/L 2-硝基苯甲醛（0.075g 2-硝基苯甲醛溶于 10mL 二甲亞砜），渦旋混勻 1min，置于 37℃恒溫振蕩器水浴中避光反應 16h。
將上述衍生液，放置至室溫，加入 5mL0.1mol/L 磷酸氫二甲溶液，用 1mol/L NaOH 調(diào)節(jié) pH 到約 7.4，4000r/min 離心 10min，上清液（對脂肪含量多的試樣，可加入 5mL 正己烷，振蕩 2min，4000r/min 離心 5min 吸取并棄掉正己烷）備 HLB 柱萃取凈化用。
2、活化
依次用 5mL 甲醇、10mL 水活化。
3、上樣和洗脫
取上述備用液控制流速小于 2 mL/min 過柱。待樣液全部通過后用 10mL 水淋洗上樣柱， 棄去全部流出液并真空抽干，最后用 5 mL 乙酸乙酯洗脫柱子上的待測成分。
4、重新溶解
收集洗脫液，于 40 ℃氮氣吹干，準確加入 1.0 mL 乙腈/水（1/2，V/V）溶液溶解殘余物混勻，0.22 μm 濾膜過濾，供高效液相色譜測定。
5、HPLC 條件
色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm，5μm)
檢測器：Waters 2487 紫外雙波長檢測器；檢測波長：275nm
流動相：A-乙腈 B- 0.01mmol/L 乙酸銨（0.77g 乙酸銨，1000mL 水溶解，甲酸調(diào) pH
3.5 ）
洗脫方式：梯度洗脫，梯度條件如下：
時間/min
A/%
B/%
0.01
15.0
85.0
16.50
40.0
60.0
17.00
15.0
85.0
22.00
15.0
85.0
柱溫：30℃ 流速：1.0 mL/min 進樣量：20μL七、實驗結果
1、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結果
表 1 添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結果
回收率（%）
代謝物衍生物名稱
平均回收率（%）
RSD（%）
1
2
3
NP-AMOZ（呋喃它酮代謝物衍生物）
97.2
102.0
97.4
98.9
2.7
NP-AOZ（呋喃唑酮代謝物衍生物）
98.2
98.8
94.6
97.2
2.3
NP-AHD（呋喃妥因代謝物衍生物）
94.6
101.6
96.8
97.7
3.7
NP-SEM（呋喃西林代謝物衍生物）
96.6
97.6
94.2
96.1
1.8
2、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的紫外檢測色譜圖
圖 1 添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉中硝基呋喃代謝物衍生物檢測的液相色譜圖
